熊建萍教授组稿 | 代小峰医生:结直肠癌PD-L1调控新机制-靶向TMEM(X)增强ICB治疗疗效

时间:2023-07-08 23:06:47   热度:37.1℃   作者:网络

1 结直肠癌免疫治疗现状

结直肠癌(CRC)是全球最常见的恶性肿瘤之一,年新发病例超15万,位居全球癌症发病率第三位;年死亡人数超过5万,是第二大癌症相关死亡原因[1]。随着精准医学的发展,基于患者分子分型的靶向联合化学治疗是转移性结直肠癌(mCRC)患者的主要治疗方法。近年来,免疫检查点阻滞剂(ICB)已经改变了许多实体瘤治疗的规则 ,ICB主要通过解除肿瘤对T细胞的制动作用而恢复免疫系统的激活,其效果在多种晚期肿瘤(如非小细胞肺癌、肝癌等)中得到验证并被批准用于临床[2,3]。在mCRC中,ICB也被应用于一些特殊类型的患者,如错配修复功能缺陷 (dMMR) 或微卫星高度不稳定性 (MSI-H) 的患者[4]。遗憾的是,ICB治疗扩展到错配修复功能正常(pMMR)或微卫星稳定(MSS)的结直肠癌患者时,总体反应却不尽人意。

PD-L1通过直接结合免疫抑制受体PD1抑制T细胞激活和功能,除了参与诱导和维持正常的免疫耐受外,还经常在肿瘤细胞上被发现,并作为抗癌免疫的检查点。许多基于抗体的药物已经被开发出来来阻断PD-L1/PD1的相互作用,目的是恢复细胞毒性T细胞对肿瘤的效应反应。值得注意的是,PD-L1的表达水平在实体瘤ICB治疗中的预测作用已被多项研究所肯定[5]。然而,CRC患者中PD-L1表达与ICB治疗的相关性尚不明确,多项实验得出的结果并不一致[6]。并且,当前对CRC中PD-L1表达的调控机制的认知相对不足。因此,有必要揭示CRC中调节 PD-L1 的分子机制,这将进一步提供潜在的策略来提高抗 PD-1/PD-L1治疗的临床疗效。

2 PD-L1的转录后修饰

PD-L1的翻译后修饰(PTM)被认为是一种抵抗免疫检查点封锁的机制。PD-L1受到多种翻译后修饰的调控,如泛素化、磷酸化、糖基化和棕榈酰化[7]。最近的报道描述了在翻译后水平上控制PD-L1丰度的不同机制,如蛋白酶体介导或溶酶体介导的降解,而泛素蛋白酶体系统对PD-L1的调控尚未完全了解[8,9]

3 跨膜蛋白(TMEM)家族

跨膜蛋白(TMEM)家族成员是一类跨越脂质双分子层的跨膜蛋白,在正常生理功能和多种疾病发生过程中中发挥着重要功能,如肝脏的发育和分化、炎症的发生等[10,11]。另有多项证据显示TMEM家族成员与多种肿瘤的发生、侵袭和转移有着密不可分的关系[12,13]。在肿瘤免疫中,干扰素基因刺激物(STING),也称为 TMEM173,扮演着重要角色[14]。在转移性肿瘤细胞中,STING信号的慢性激活导致了 I型 IFN的抑制、indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO)的释放和非经典 NF-κB 信号的上调等情况的发生,这有助于肿瘤细胞免疫逃逸和转移[15]。同时,STING 还可促进 PD-L1 的表达和诱导自噬[15]。研究指出结肠癌中STING 的活性经常受到抑制,这有助于结肠癌细胞躲避免疫系统的监视[15]。然而,另一项研究指出,MMR 蛋白的功能缺陷会引发细胞质中 DNA 的异常积累,这促进了肿瘤细胞内cGAS-STING 先天免疫通路的内在激活[16]。这些事件形成了具有免疫活性的 TME,并可能是dMMR型CRC患者使用 ICB治疗有效的原因之一[16]。组成性激活STING信号通路,即使在 MMR 蛋白功能正常的肿瘤中,也可以增强肿瘤细胞对ICB 治疗的敏感性[16]

4 课题组研究进展

我们课题组重点研究了PD-L1去泛素化的调控机制,这被认为是维持其蛋白稳定性及其抑制免疫功能的一种保护机制。为研究PD-L1调控CRC进展的机制,我们通过蛋白互作网站发现,PD-L1可与TMEM家族中一成员(后文简称TMEMX)相互作用,接着我们展开免疫荧光(IF)、蛋白质免疫共沉淀(Co-IP)、GST-pull down和泛素化等实验证明PD-L1的确可与TMEM直接结合,且TMEM(X)可减少PD-L1的泛素化降解;接下来为验证TMEM(X)能否调控PD-L1的表达,我们分别使用siRNA和过表达质粒转染不同的结直肠癌细胞,通过蛋白免疫印迹(WB)及实时荧光定量(Q-PCR)发现,TMEM(X)表达减少后PD-L1蛋白表达也相应减少,而过表达TMEM(X)后PD-L1表达也随之增加且存在剂量依赖性,但是TMEM(X)不影响PD-L1 mRNA的表达,这说明TMEM(X)在转录后水平调控PD-L1的表达。我们还进行了淋巴细胞与肿瘤细胞共培养实验,结果发现下调TMEM(X)会增加结直肠癌细胞的凋亡率,使结直肠癌细胞对淋巴细胞介导的细胞杀伤功能更加敏感。

随后我们进行动物实验,使用Sh-NC、Sh-TMEM(X)慢病毒稳转结直肠癌细胞株HCT116及CT26,分别接种在BALB/C-nude及BALB-C小鼠皮下,结果发现在严重免疫缺陷的NCG小鼠中,shTMEM(X)细胞来源的肿瘤生长与shNC对照细胞稍缩小,相反,我们发现shTMEM (X)在很大程度上限制了免疫活性BALB/C小鼠中肿瘤的生长,这表明TMEM(X)在肿瘤免疫逃避中起着关键作用。最后我们收集了128例临床样本进行免疫组化(IHC)及生存分析发现,TMEM(X)在CRC组织中的表达量高于正常组织,同时TMEM(X)的表达与PD-L1的表达呈正相关,与CD8阳性T细胞呈负相关,高表达TMEM(X)的结直肠癌组织同时高表达PD-L1,而CD8阳性T表达减少;Kaplan-Meier生存分析发现TMEM(X)高表达的患者的总生存期明显短于TMEM(X)低表达或不表达的患者,提示TMEM(X)具有重要的临床意义,可作为预测结直肠癌预后的生物标志物。

总之,我们的研究揭示了在结直肠癌中TMEM(X)与PD-L1结合,从而减少PD-L1的泛素化降解以促进结直肠癌细胞免疫逃逸。免疫治疗是近些年新兴的抗肿瘤疗法,如何提高免疫治疗的疗效也是研究者们讨论最多的话题之一,基于我们的研究,我们认为结直肠癌细胞TMEM(X)表达水平可能作为预测免疫治疗疗效的生物标志物。

参考文献

1. Siegel RL, Miller KD, Wagle NS, et al. Cancer statistics, 2023. CA Cancer J Clin. 2023;73:17–48.

2. Bagchi S, Yuan R, Engleman EG. Immune Checkpoint Inhibitors for the Treatment of Cancer: Clinical Impact and Mechanisms of Response and Resistance. Annu Rev Pathol. 2021;16:223–249.

3. Zou W, Wolchok JD, Chen L. PD-L1 (B7-H1) and PD-1 pathway blockade for cancer therapy: Mechanisms, response biomarkers, and combinations. Sci Transl Med. 2016;8:328rv4.

4. Fan A, Wang B, Wang X, et al. Immunotherapy in colorectal cancer: current achievements and future perspective. Int J Biol Sci. 2021;17:3837–3849.

5. Patel SP, Kurzrock R. PD-L1 Expression as a Predictive Biomarker in Cancer Immunotherapy. Mol Cancer Ther. 2015;14:847–856.

6. J W, S L, Z Z, et al. Exploring immunotherapy in colorectal cancer. Journal of hematology & oncology. 2022;15.

7. Hsu J-M, Li C-W, Lai Y-J, et al. Posttranslational Modifications of PD-L1 and Their Applications in Cancer Therapy. Cancer Res. 2018;78:6349–6353.

8. Burr ML, Sparbier CE, Chan YC, Williamson JC, Woods K, Beavis PA, et al. CMTM6 maintains the expression of PD-L1 and regulates anti-tumour immunity. Nature. 2017;549:101–5. 

9. Mezzadra R, Sun C, Jae LT, Gomez-Eerland R, de Vries E, Wu W, et al. Identifification of CMTM6 and CMTM4 as PD-L1 protein regulators. Nature. 2017;549:106–10.

10. Dodeller F, Gottar M, Huesken D, et al. The lysosomal transmembrane protein 9B regulates the activity of inflammatory signaling pathways. J Biol Chem. 2008;283:21487–21494.

11. Hayez A, Malaisse J, Roegiers E, et al. High TMEM45A expression is correlated to epidermal keratinization. Exp Dermatol. 2014;23:339–344.

12. Schmit K, Michiels C. TMEM Proteins in Cancer: A Review. Front Pharmacol. 2018;9:1345.

13. Marx S, Dal Maso T, Chen J-W, et al. Transmembrane (TMEM) protein family members: Poorly characterized even if essential for the metastatic process. Semin Cancer Biol. 2020;60:96–106.

14. Chen Q, Sun L, Chen ZJ. Regulation and function of the cGAS-STING pathway of cytosolic DNA sensing. Nat Immunol. 2016;17:1142–1149.

15. Kwon J, Bakhoum SF. The Cytosolic DNA-Sensing cGAS-STING Pathway in Cancer. Cancer Discov. 2020;10:26–39.

16. Xia T, Konno H, Ahn J, et al. Deregulation of STING Signaling in Colorectal Carcinoma Constrains DNA Damage Responses and Correlates With Tumorigenesis. Cell Rep. 2016;14:282–297.

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