冷冻保存显著改变血小板的表型;产生不同的亚群，这可能会影响血小板白细胞聚集体（PLA）的形成。PLA 具有免疫调节作用，与输血相关不良事件相关。因此，本研究的目的是使用单核细胞样细胞系（THP-1）检查冷冻保存对血小板形成PLA的能力的影响。

研究在冷冻前，解冻后和用TRAP-6或A23187刺激后测试血小板，单独和与THP-1细胞共培养1小时和24小时（n = 6）。使用多色成像流式细胞术使用Apotracker Green（ApoT），CD1b，CD42P，CD62和CD61分析血小板亚群和血小板-THP-45细胞聚集体。

图1. 使用成像流式细胞术和 IDEAS v1.6 分析软件对血小板-THP-2 细胞聚集体进行计数和表型的设门和分析策略。显示用于分析（A）血小板和（B）血小板-THP-1细胞共培养的门控策略。（C）创建基于CD61-APC的荧光掩膜以计数与THP-1细胞结合的血小板数量。血小板掩膜是通过依次应用斑点、分水岭、强度和范围掩膜（蓝色突出显示区域）来创建的，以减少荧光背景并允许分析单个血小板。（D）将血小板掩膜与斑点计数功能相结合，以枚举与每个THP-1细胞结合的血小板数量。（E）基于CD42b-PE Dazzle 594，CD62P-PE和Apotracker-Green荧光图像的染色模式分析结合血小板的表型。图像中计数的血小板数量由图像右上角的黄色数字表示。EVs = 细胞外囊泡

图2. 冷冻保存和活化差异地改变血小板表面膜上白细胞粘附受体的丰度。用Apotracker-Green，CD62P-PE，CD42b-PE-Dazzle 594和CD61-APC染色血小板，并通过60倍放大倍率的成像流式细胞术进行分析。

图3. 冷冻保存和活化促进不同亚群的形成。用Apotracker-Green，CD62P-PE，CD42b-PE-Dazzle 594和CD61-APC染色血小板，并通过60×放大倍率的成像流式细胞术进行分析。

图4. 使用成像流式细胞术对血小板-THP-1 细胞聚集体进行可视化和定量。检查THP-1细胞（A）单独或在与（B）预冷冻，（C）解冻后，（D）TRAP-6刺激或（E）A23187刺激的血小板共同孵育1小时。

图5. 血小板冷冻保存和活化增加了血小板-THP-1细胞聚集体中存在的血小板密度。

冷冻保存导致活化（ApoT-/ CD42b + / CD62P +），促凝血剂（ApoT + / CD42b + / CD62P +）和新型（ApoT + / CD42b + / CD62P-）血小板亚群的产生。与预冷冻但 TRAP-1 或 A6 刺激的血小板相比，冷冻保存的血小板与 THP-23187 细胞的共同孵育增加了 PLA 的形成。表面膜上的P-选择素与PLA形成增加相关。

与传统储存的血小板相比，冷冻保存的血小板具有优势，可增强体外止血功能并延长保质期，从而能够供应给远程医疗环境。总的来说，研究结果表明，冷冻保存增加了血小板和THP-1细胞之间的相互作用，这主要是由于促凝血血小板的增加。需要进一步调查以确定这种相互作用的免疫学后果。

 

 

 

原始出处：

Winskel-Wood B, Padula MP, Marks DC, Johnson L. The phenotype of cryopreserved platelets influences the formation of platelet-leukocyte aggregates in an in vitro model. Platelets. 2023 Dec;34(1):2206916. doi: 10.1080/09537104.2023.2206916. PMID: 37143347.